1. Цель: Данная процедура направлена на обеспечение стандартизированного порядка проведения асептических операций и защиты стерильных помещений.
2. Область применения: лаборатория биологических исследований.
3. Ответственное лицо: Руководитель отдела контроля качества, Тестировщик
4. Определение: Отсутствует
5. Меры предосторожности
Для предотвращения микробного загрязнения необходимо строго соблюдать асептическую технику; операторы должны выключать УФ-лампу перед входом в стерильное помещение.
6. Процедуры
6.1. Стерильное помещение должно быть оборудовано стерильной операционной и буферной комнатой. Чистота стерильной операционной должна соответствовать классу 10000. Температура в помещении должна поддерживаться на уровне 20-24°C, а влажность — на уровне 45-60%. Чистота чистого рабочего места должна соответствовать классу 100.
6.2. Стерильное помещение должно содержаться в чистоте, и строго запрещается накапливать мусор во избежание загрязнения.
6.3. Строго предотвращайте загрязнение всего стерилизационного оборудования и питательных сред. Загрязненное оборудование следует прекратить использовать.
6.4. Стерильное помещение должно быть оборудовано дезинфицирующими средствами рабочей концентрации, такими как 5%-ный раствор крезола, 70%-ный спирт, 0,1%-ный раствор хлорметионина и др.
6.5. Стерильное помещение следует регулярно стерилизовать и очищать с использованием соответствующих дезинфицирующих средств, чтобы обеспечить соответствие чистоты стерильного помещения установленным требованиям.
6.6. Все инструменты, посуда и другие предметы, которые необходимо внести в стерильное помещение, должны быть плотно упакованы и стерилизованы соответствующими методами.
6.7. Перед входом в стерильную комнату персонал должен вымыть руки с мылом или дезинфицирующим средством, а затем переодеться в специальную рабочую одежду, обувь, головные уборы, маски и перчатки в буферной комнате (или еще раз протереть руки 70%-ным этанолом) перед входом в стерильную комнату. Проведение операций в бактериологической камере.
6.8. Перед использованием стерильной комнаты необходимо включить ультрафиолетовую лампу для облучения и стерилизации более чем на 30 минут, а также одновременно включить продувку чистым столом. После завершения операции стерильную комнату следует своевременно очистить, а затем стерилизовать ультрафиолетовым светом в течение 20 минут.
6.9. Перед проверкой внешняя упаковка образца должна оставаться неповрежденной и не должна быть вскрыта во избежание загрязнения. Перед проверкой продезинфицируйте внешнюю поверхность ватными шариками, смоченными 70% спиртом.
6.10. Во время каждой операции необходимо проводить отрицательный контроль для проверки надежности асептического режима.
6.11. При всасывании бактериальной жидкости необходимо использовать присоску. Не прикасайтесь к соломинке ртом напрямую.
6.12. Инокуляционную иглу необходимо стерилизовать пламенем до и после каждого использования. После охлаждения культуру можно инокулировать.
6.13. Соломинки, пробирки, чашки Петри и другие предметы, содержащие бактериальную жидкость, следует замочить в стерилизационном ведре с 5% раствором лизола для дезинфекции, а через 24 часа вынуть и промыть.
6.14. Если на стол или пол пролилась бактериальная жидкость, следует немедленно полить загрязненный участок 5%-ным раствором карболовой кислоты или 3%-ным раствором лизола и оставить на 30 минут перед обработкой. Если рабочая одежда и головные уборы загрязнены бактериальной жидкостью, их следует немедленно снять и постирать после стерилизации паром под высоким давлением.
6.15. Все предметы, содержащие живые бактерии, необходимо дезинфицировать перед ополаскиванием под краном. Категорически запрещается загрязнять канализацию.
6.16. Количество колоний в стерильном помещении следует проверять ежемесячно. На чистом рабочем столе возьмите несколько стерильных чашек Петри с внутренним диаметром 90 мм и асептически влейте в них около 15 мл питательной агаровой среды, предварительно охлажденной до 45°C. После застывания поместите чашки вверх дном в инкубатор при температуре 30-35°C на 48 часов. После подтверждения стерильности возьмите 3-5 чашек и разместите их слева, посередине и справа от рабочего места. После открытия крышек и выдержки в течение 30 минут поместите чашки вверх дном в инкубатор при температуре 30-35°C на 48 часов, а затем извлеките для исследования. Среднее количество различных бактерий на чашке в чистом помещении класса 100 не должно превышать 1 колонию, а в чистом помещении класса 10000 — 3 колонии. Если предел превышен, стерильное помещение следует тщательно дезинфицировать до тех пор, пока повторные проверки не покажут соответствие требованиям.
7. См. главу (Метод проверки стерильности) в разделе «Методы гигиенической инспекции лекарственных средств» и «Китайские стандартные операционные процедуры инспекции лекарственных средств».
8. Отдел дистрибуции: Отдел управления качеством
Технические рекомендации для чистых помещений:
После создания стерильной среды и стерильных материалов необходимо поддерживать стерильность для изучения конкретного известного микроорганизма или использования его функций. В противном случае различные микроорганизмы извне могут легко смешаться с ним. Явление смешивания посторонних микроорганизмов извне в микробиологии называется бактериальным загрязнением. Предотвращение загрязнения является критически важным методом в микробиологической работе. Полная стерилизация, с одной стороны, и предотвращение загрязнения, с другой, являются двумя аспектами асептической техники. Кроме того, необходимо предотвратить попадание изучаемых микроорганизмов, особенно патогенных микроорганизмов или генетически модифицированных микроорганизмов, не существующих в природе, из экспериментальных контейнеров во внешнюю среду. Для этих целей в микробиологии существует множество мер.
Стерильная комната обычно представляет собой небольшое помещение, специально оборудованное в микробиологической лаборатории. Она может быть построена из листового металла и стекла. Площадь не должна быть слишком большой, около 4-5 квадратных метров, а высота потолков — около 2,5 метров. Снаружи стерильной комнаты должна быть оборудована буферная комната. Двери буферной и стерильной комнат не должны быть обращены в одну сторону, чтобы предотвратить попадание посторонних бактерий из-за циркуляции воздуха. Как стерильная, так и буферная комнаты должны быть герметичными. Вентиляционное оборудование внутри помещения должно быть оснащено фильтрами воздуха. Пол и стены стерильной комнаты должны быть гладкими, трудно загрязняющимися и легко моющимися. Рабочая поверхность должна быть ровной. Как стерильная, так и буферная комнаты оборудованы ультрафиолетовыми лампами. Ультрафиолетовые лампы в стерильной комнате расположены на расстоянии 1 метра от рабочей поверхности. Персонал, входящий в стерильную комнату, должен носить стерильную одежду и головные уборы.
В настоящее время стерильные помещения в основном используются на микробиологических заводах, тогда как в обычных лабораториях применяются чистые боксы. Основная функция чистого бокса заключается в использовании устройства ламинарного воздушного потока для удаления различных мельчайших частиц пыли, включая микроорганизмы, с рабочей поверхности. Электрическое устройство пропускает воздух через HEPA-фильтр, а затем на рабочую поверхность, обеспечивая постоянный поток стерильного воздуха. Кроме того, сбоку, ближе к наружному пространству, имеется высокоскоростная воздушная завеса, предотвращающая попадание бактерий извне.
В местах со сложными условиями вместо чистых рабочих столов можно использовать деревянные стерильные боксы. Стерильный бокс имеет простую конструкцию и легко перемещается. На передней части бокса есть два отверстия, которые закрываются дверцами типа «тяни-толкай», когда бокс не используется. Во время работы можно просунуть руки внутрь. Верхняя часть передней панели оборудована стеклом для удобства работы внутри. Внутри бокса находится ультрафиолетовая лампа, а через небольшую дверцу сбоку можно поместить инструменты и бактерии.
В настоящее время асептические методы работы играют ключевую роль не только в микробиологических исследованиях и их применении, но и широко используются во многих биотехнологиях. Например, в трансгенных технологиях, технологиях моноклональных антител и т. д.
Дата публикации: 06 марта 2024 г.