1. Цель: Целью данной процедуры является обеспечение стандартизированной процедуры асептических операций и защиты стерильных помещений.
2. Область применения: биологическая испытательная лаборатория.
3. Ответственное лицо: испытатель-инспектор отдела контроля качества
4.Определение: Нет
5. Меры предосторожности
Строго выполняйте асептические операции, чтобы предотвратить микробное загрязнение; операторы должны выключать УФ-лампу перед входом в стерильное помещение.
6.Процедуры
6.1. Стерильное помещение должно быть оборудовано стерильной операционной и буферной комнатой. Класс чистоты стерильной операционной должен соответствовать 10000. Температура в помещении должна поддерживаться на уровне 20–24°С, а влажность – 45–60%. Класс чистоты операционного стола должен соответствовать 100.
6.2. Стерильное помещение следует содержать в чистоте, категорически запрещается скапливать мусор во избежание заражения.
6.3. Строго не допускайте загрязнения всего стерилизационного оборудования и питательных сред. Загрязнённые среды следует прекратить использовать.
6.4. Стерильное помещение должно быть оснащено дезинфицирующими средствами рабочей концентрации, такими как 5% раствор крезола, 70% раствор спирта, 0,1% раствор хлорметионина и т.д.
6.5. Стерильное помещение следует регулярно стерилизовать и очищать соответствующим дезинфицирующим средством, чтобы гарантировать соответствие чистоты стерильного помещения установленным требованиям.
6.6. Все инструменты, приборы, посуда и другие предметы, которые необходимо внести в стерильное помещение, должны быть плотно упакованы и простерилизованы соответствующими методами.
6.7. Перед входом в стерильную комнату персонал должен вымыть руки с мылом или дезинфицирующим средством, а затем переодеться в специальную спецодежду, обувь, шапочки, маски и перчатки в буферной комнате (или повторно протереть руки 70% раствором этанола). Выполнять операции в бактериологической камере.
6.8. Перед использованием стерильного помещения необходимо включить ультрафиолетовую лампу для облучения и стерилизации более чем на 30 минут, а также одновременно включить операционный стол для продувки воздухом. После завершения операции необходимо своевременно провести уборку стерильного помещения и затем простерилизовать его ультрафиолетовым излучением в течение 20 минут.
6.9. Перед проверкой внешняя упаковка испытуемого образца должна быть целой и не должна вскрываться во избежание загрязнения. Перед проверкой продезинфицируйте внешнюю поверхность ватными дисками, смоченными 70% спиртом.
6.10. Во время каждой операции необходимо проводить отрицательный контроль для проверки надежности асептической операции.
6.11. При всасывании бактериальной жидкости необходимо использовать специальный шарик-присоску. Не прикасайтесь ртом к соломинке.
6.12. Иглу для инокуляции необходимо стерилизовать пламенем до и после каждого использования. После охлаждения культуру можно инокулировать.
6.13. Соломинки, пробирки, чашки Петри и другую посуду, содержащую бактериальную жидкость, следует замочить в стерилизационном ведре с 5% раствором лизола для дезинфекции, а через 24 часа вынуть и промыть.
6.14. При попадании на стол или пол бактериальной жидкости необходимо немедленно полить загрязненный участок 5% раствором карболовой кислоты или 3% раствором лизола не менее чем на 30 минут перед обработкой. При попадании бактериальной жидкости на рабочую одежду и головные уборы их следует немедленно снять и выстирать после стерилизации паром под высоким давлением.
6.15. Все предметы, содержащие живые бактерии, необходимо продезинфицировать перед ополаскиванием под краном. Категорически запрещается загрязнять канализацию.
6.16. Количество колоний в стерильной комнате следует проверять ежемесячно. При открытом чистом столе возьмите несколько стерильных чашек Петри с внутренним диаметром 90 мм и асептически введите около 15 мл питательной агаризованной питательной среды, которая была расплавлена и охлаждена примерно до 45 ° C. После застывания переверните ее вверх дном при 30-35 ℃ Инкубируйте в течение 48 часов в инкубаторе. После подтверждения стерильности возьмите от 3 до 5 чашек и поместите их слева, посередине и справа от рабочего положения. После открытия крышки и экспозиции в течение 30 минут переверните их в инкубатор при температуре от 30 до 35 ° C на 48 часов и выньте их. осмотрите. Среднее количество разных бактерий на чашке в чистой зоне класса 100 не должно превышать 1 колонии, а среднее количество в чистой комнате класса 10000 не должно превышать 3 колоний. В случае превышения предельного значения стерильное помещение следует тщательно продезинфицировать до тех пор, пока повторные проверки не покажут соответствие требованиям.
7. См. главу (Метод проверки стерильности) в документах «Методы гигиенической инспекции лекарственных средств» и «Стандартные операционные практики Китая по инспекции лекарственных средств».
8. Отдел дистрибуции: Отдел управления качеством
Техническое руководство по чистым помещениям:
После получения стерильной среды и стерильных материалов необходимо поддерживать стерильное состояние для изучения конкретного известного микроорганизма или использования его функций. В противном случае различные внешние микроорганизмы могут легко проникнуть в среду. Явление проникновения посторонних микроорганизмов извне в микробиологии называется контаминацией. Предотвращение контаминации является критически важным методом микробиологической работы. Полная стерилизация, с одной стороны, и предотвращение контаминации, с другой, – это два аспекта асептического метода. Кроме того, необходимо предотвратить попадание изучаемых микроорганизмов, особенно патогенных или генно-инженерных, не существующих в природе, из наших экспериментальных контейнеров во внешнюю среду. Для этих целей в микробиологии существует множество мер.
Стерильная комната - это обычно небольшая комната, специально оборудованная в микробиологической лаборатории. Может быть построена из листов и стекла. Площадь не должна быть слишком большой, около 4-5 квадратных метров, а высота должна быть около 2,5 метров. Буферная комната должна быть организована снаружи стерильной комнаты. Дверь буферной комнаты и дверь стерильной комнаты не должны быть направлены в одну сторону, чтобы предотвратить попадание воздушного потока в помещение разных бактерий. Как стерильная комната, так и буферная комната должны быть герметичными. Внутреннее вентиляционное оборудование должно иметь устройства фильтрации воздуха. Пол и стены стерильной комнаты должны быть гладкими, трудно собирающими грязь и легко чистящимися. Рабочая поверхность должна быть ровной. Как стерильная комната, так и буферная комната оснащены ультрафиолетовыми лампами. Ультрафиолетовые лампы в стерильной комнате находятся на расстоянии 1 метра от рабочей поверхности. Персонал, входящий в стерильную комнату, должен носить стерилизованную одежду и шапочки.
В настоящее время стерильные помещения в основном используются на микробиологических заводах, в то время как в лабораториях общего профиля используются стерильные боксы. Основная функция стерильных боксов — использование устройства ламинарного потока воздуха для удаления мельчайшей пыли, включая микроорганизмы, с рабочих поверхностей. Электронное устройство пропускает воздух через HEPA-фильтр и затем подает его на рабочую поверхность, обеспечивая постоянный контроль потока стерильного воздуха. Кроме того, на внешней стороне бокса установлена высокоскоростная воздушная завеса, предотвращающая проникновение бактериального воздуха.
В местах со сложными условиями вместо стерильного стола можно использовать деревянные стерильные боксы. Стерильный бокс имеет простую конструкцию и легко перемещается. На передней панели бокса имеются два отверстия, которые в нерабочем состоянии закрываются дверцами-толкателями. Во время работы внутрь можно засунуть руки. Верхняя часть передней панели оснащена стеклом для удобства работы внутри. Внутри бокса установлена ультрафиолетовая лампа, а через небольшую дверцу сбоку можно загружать инструменты и бактерицидные вещества.
В настоящее время асептические методы работы играют ключевую роль не только в микробиологических исследованиях и прикладных задачах, но и широко используются во многих биотехнологиях, например, в трансгенных технологиях, технологиях моноклональных антител и т. д.
Время публикации: 06 марта 2024 г.